無(wú)菌檢查法 微生物限度檢查法 一次性使用衛(wèi)生用品微生物檢查方法

1 1 0 0 生物檢查法  中國(guó)藥典 2015 年版【節(jié)選】

1 1 0 1 無(wú)菌檢查法（集菌儀法）

無(wú)菌檢查法系用于檢 査藥典要求無(wú)菌的藥品、生物制品、醫(yī)療器具、原料 、輔料及其他品種是否無(wú)菌的一種方法 。若供試品符合無(wú)菌檢查法的規(guī)定，僅表明了供試品在該檢驗(yàn)條件下未發(fā)現(xiàn)微生物污染。無(wú)菌檢查應(yīng)在無(wú)菌條件下進(jìn)行，試驗(yàn)環(huán)境必須達(dá)到無(wú)菌檢査的要求，檢驗(yàn)全過(guò)程應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期按醫(yī)藥工業(yè)潔凈室（區(qū)）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測(cè)試方法的現(xiàn)行國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行潔凈度確認(rèn)。隔離系統(tǒng)應(yīng)定期按相關(guān)的要求進(jìn)行驗(yàn)證，其內(nèi)部環(huán)境的潔凈度須符合無(wú)菌檢查的要求。 日常檢驗(yàn)還需對(duì)試驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行監(jiān)控。

1 . 薄膜過(guò)濾法

薄膜過(guò)濾法一般應(yīng)采用封閉式薄膜過(guò)濾器。無(wú)菌檢査用的濾膜孔徑應(yīng)不大于0.45pm，直 徑 約 為 50mm。根據(jù)供試品及其溶劑的特性選擇濾膜材質(zhì)。使 用時(shí)，應(yīng)保證濾膜在過(guò)濾前后的完整性。水溶性供試液過(guò)濾前應(yīng)先將少量的沖洗液過(guò)濾，以潤(rùn)濕濾膜6 油類(lèi)供試品，其濾膜和過(guò)濾器在使用前應(yīng)充分干燥。為發(fā)揮濾膜的最大過(guò)濾效率，應(yīng)注意保持供試品溶液及沖洗液覆蓋整個(gè)濾膜表面。供試液經(jīng)薄膜過(guò)濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量一般為100ml，且總沖洗量不得超過(guò)1000ml，以避免濾膜上的微生物受損傷。水 溶 液 供 試 品 取規(guī)定量，直接過(guò)濾，或混合至含不少于 100ml適宜稀釋液的無(wú)菌容器中，混勻 ，立即過(guò)濾。如供試品具有抑菌作用，須用沖洗液沖洗濾膜，沖洗次數(shù)一般不少于三次，所用的沖洗量、沖洗方法同方法適用性試驗(yàn)。除生物制品外，一般樣品沖洗后，1 份 濾 器 中 加 人 100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份 濾 器 中 加 入 100ml胰酪大豆胨液體

培養(yǎng)基。生物制品樣品沖洗后，2 份 濾 器 中 加 入 100ml硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基，1 份 濾 器 中 加 人 100ml胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基。

具有導(dǎo)管的醫(yī)療器具（輸血、輸液袋等）供 試 品 取規(guī)定量 ，每個(gè)最小包裝用50?100ml沖洗液分別沖洗內(nèi)壁，收集沖洗液于無(wú)菌容器中，然后照水溶液供試品項(xiàng)下方法操作。同時(shí)應(yīng)采用直接接種法進(jìn)行包裝中所配帶的針頭的無(wú)菌檢査。

1 1 0 5 非無(wú)菌產(chǎn)品微生物限度檢查：微生物計(jì)數(shù)法（微生物限度儀法）

微生物計(jì)數(shù)法系用于能在有氧條件下生長(zhǎng)的嗜溫細(xì)菌和真菌的計(jì)數(shù)。

當(dāng)本法用于檢查非無(wú)菌制劑及其原、輔料等是否符合相應(yīng)的微生物限度標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)按下述規(guī)定進(jìn)行檢驗(yàn)，包括樣品的取樣量和結(jié)果的判斷等。除另有規(guī)定外，本法不適用于活菌制劑的檢査。

微生物計(jì)數(shù)試驗(yàn)環(huán)境應(yīng)符合微生物限度檢查的要求。檢驗(yàn)全過(guò)程必須嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影響供試品中微生物的檢出。單向流空氣區(qū)域、工作臺(tái)面及環(huán)境應(yīng)定期進(jìn)行監(jiān)測(cè)。

如供試品有抗菌活性，應(yīng)盡可能去除或中和。供試品檢査 時(shí) ，若使用了中和劑或滅活劑，應(yīng)確認(rèn)其有效性及對(duì)微生物無(wú)毒性。

供試液制備時(shí)如果使用了表面活性劑，應(yīng)確認(rèn)其對(duì)微生物無(wú)毒性以及與所使用中和劑或滅活劑的相容性。

計(jì)數(shù)方法

計(jì)數(shù)方法包括平皿法、薄膜過(guò)濾法和最可能數(shù)法（Most-Probable-Number Method, 簡(jiǎn)稱(chēng) MPN 法）。MPN 法用于微生物計(jì)數(shù)時(shí)度較差，但對(duì)于某些微生物污染量很小的供試 品 ，M PN法可能是更適合的方法。

供試品檢查時(shí)，應(yīng)根據(jù)供試品理化特性和微生物限度標(biāo)準(zhǔn)等因素選擇計(jì)數(shù)方法，檢測(cè)的樣品量應(yīng)能保證所獲得的試驗(yàn)結(jié)果能夠判斷供試品是否符合規(guī)定。所選方法的適用性須經(jīng)確認(rèn)。

計(jì)數(shù)培養(yǎng)基適用性檢査和供試品計(jì)數(shù)方法適用性試驗(yàn)

供 試 品 微 生 物 計(jì) 數(shù) 中 所 使 用 的 培 養(yǎng) 基 應(yīng) 進(jìn) 行 適 用 性檢查。

供試品的微生物計(jì)數(shù)方法應(yīng)進(jìn)行方法適用性試驗(yàn)，以確認(rèn)所采用的方法適合于該產(chǎn)品的微生物計(jì)數(shù)。

若檢驗(yàn)程序或產(chǎn)品發(fā)生變化可能影響檢驗(yàn)結(jié)果時(shí)，計(jì)數(shù)方法應(yīng)重新進(jìn)行適用性試驗(yàn)。

GB15979-2002 一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)（選）